1.项目来源及背景： 来源：上海卫生和计划生育委员会 背景：正常情况下，在肿瘤形成前机体免疫系统可通过细胞免疫特异性杀灭引发肿瘤的突变细胞。恶性肿瘤的发生、发展和术后局部复发、远处转移与机体免疫功能低下、肿瘤细胞逃逸了机体的免疫监控有重要关系。随着肿瘤免疫学研究的不断深入发展，近年来国内外众多学者除继续深入研究机体外周血细胞免疫功能状况外，更注重于研究恶性肿瘤微环境中细胞免疫功能状况。近期文献报道，在对肾癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、结直肠癌等肿瘤微环境细胞免疫功能状况的研究中发现，调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）起着重要的细胞免疫抑制作用，并与患者预后有关〔1-4〕。Treg细胞是一类具有免疫抑制作用的T细胞，其可抑制一些免疫细胞发挥功能，使肿瘤细胞发生免疫逃逸，但被抑制的免疫细胞类型、数量及与患者的预后关系文献报道并不一致。Sagaguchi S等认为，Treg细胞可抑制CD4、CD8 T细胞及树突状细胞（DC）的功能，对NK细胞及NKT细胞的抑制作用不明确〔5〕。而Shevach EM则认为，Treg细胞对CD4、CD8 T细胞、DC、NK细胞及NK T细胞功能均可抑制〔6〕。多数研究认为肿瘤内Treg细胞的浸润数量与患者预后呈负相关〔2-4，7〕；但也有认为二者不相关的研究报道〔8〕。因此有关此方面的研究国内外学者均在深入进行中。 2.研究目的及意义： 本课题应用免疫组织化学方法检测胃癌患者肿瘤、瘤旁、正常胃壁组织及前哨淋巴结中Treg细胞和多种免疫细胞密度，位置及功能状况，分析Treg细胞与多种免疫细胞间的关系及其与患者临床病理和预后的关系，为进一步研究免疫干预治疗预防胃癌根治术后局部复发和/或远处转移的提供理论基础。 3.技术原理及性能指标： 采用免疫组织化学方法检测200例胃癌患者肿瘤、瘤旁1cm 、瘤旁7- 8cm （正常胃壁组织）及前哨淋巴结中Treg细胞和多种免疫细胞密度、位置及功能状况，分析Treg细胞与多种免疫细胞间的关系及其与患者临床病理和预后的关系。 一 病例选择 1.经病理证实的首次胃癌根治术患者。 2.患者术前未进行过化疗、放疗、生物及免疫治疗等。 3.患者以往无其他恶性肿瘤病史。 4.患者无自身免疫性疾病病史。 二 标本采集和制作 1.开腹后先作前哨淋巴结定位，立即切取1-3个前哨淋巴结于10%中性福尔马林中固定。 2.肿瘤标本离体后即切取中心无坏死处肿瘤组织、瘤旁1cm及瘤旁7-8cm肠组织各一块于10%中性福尔马林中固定。 3.将采集的标本作常规组织处理、石蜡包埋、行5um组织切片，备作免疫细胞检测。 4.肿瘤标本及转移淋巴结均作常规病理检查及免疫组化检查。 三 免疫细胞检测 1.采用免疫组织化学方法（免疫细胞检测试剂盒）检测200例胃癌患者肿瘤、瘤旁1cm 、瘤旁7-8cm （正常胃壁组织）及前哨淋巴结中Treg细胞和CD3、CD4、CD8、B细胞、NK细胞等多种免疫细胞密度、位置及功能状况。结果判定：在400倍高倍显微镜下观察并计数阳性细胞（细胞膜或细胞核呈红色 或棕色颗粒者为阳性细胞）。 2.采用TUNEL试剂盒检测200例胃癌患者肿瘤、瘤旁1cm 、瘤旁7-8cm （正常胃壁组织）及前哨淋巴结中Treg细胞和CD3、CD4、CD8、B细胞、NK细胞等多种免疫细胞凋亡状况。 四 患者临床资料收集及随访 1.收集患者临床病理资料：包括年龄、性别、肿瘤部位、淋巴结转移情况、肿瘤分化程度、组织学分型、临床病理分期等。 2.患者随访：包括定期检测血清CEA等肿瘤相关指标、胸部X线、肝脏B超或CT、胃镜等检查，观察肿瘤术后局部复发和/或转移情况等。 五 结果分析 完成对上海交通大学附属新华医院崇明分院普外科2007年1月-2008年12月胃癌手术患者，共200例采用免疫组织化学方法检测200例胃癌患者肿瘤、瘤旁1cm 、瘤旁7- 8cm （正常胃壁组织）及前哨淋巴结中Treg细胞和多种免疫细胞密度、位置及功能状况，利用均值分组，采用t检验，卡方检验，Cox生存分析等统计学方法，了解Treg细胞与多种免疫细胞间的关系及其与患者临床病理和预后的关系。 4.社会经济效益： 1）可为加强胃癌根治术后病人免疫治疗，预防术后局部复发和/或远处转移提供理论依据。 2）可为进一步研究免疫干预治疗预防胃癌根治术后局部复发和/或远处转移提供理论基础。 人才培养情况 1）通过本课题研究可提高上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院众多外科医师参与科研的积极性。 2）通过本课题研究可提升科室3名中青年医师的科研能力。