1.项目来源及背景： 来源：上海卫生和计划生育委员会 背景：PLK 1 沉默对胃癌的影响已有很多证据和研究，而胃癌的发生多在老年人，此类病人的叶酸水平偏低，PLK 1 沉默在叶酸缺乏的情况下，其效率和作用如何？尚未有文献报道。我们在实验中发现：胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823 、 N87和胃粘膜细胞株HFI-145在转染PLK 1 特异 siRNA后，PLK 1 mRNA 和蛋白表达均减少。对于胃癌细胞株，PLK 1 siRNA导致其细胞增生抑制、G2M期阻滞和凋亡增加，叶酸缺乏可以增加此作用，对于胃粘膜细胞株HFI-145，则没有发现此效应。叶酸受体 α （FR-α） 在当成肿瘤标志物和肿瘤治疗靶点上是大有可为的，是一个潜在的肿瘤标志物。亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenete-trahydrofolate reductase，MTHFR）是叶酸提供一碳单位时所需要的关键酶.近年来，关于MTHFR多态性与肿瘤关系的研究较多，目前已发现其与结、直肠癌和急性淋巴细胞白血病等多种的发生有密切的联系.基因芯片在肿瘤新基因的筛选、基因组学的研究、肿瘤亚型分类、肿瘤基因诊断、药物筛选等几个方面有重要作用 2.研究目的及意义： 本课题研究的总目标是确定PLK 1 siRNA、叶酸缺乏及其联合后对胃癌细胞的FR-α表达、MTHFR多态性和肿瘤基因的影响，以及在叶酸缺乏环境得以纠正后，上述影响可否消失。若能证明PLK 1 siRNA和叶酸缺乏是有效的治疗手段，对胃癌病人将是一大福音，肿瘤基因的变化的测定，对胃癌治疗策略的指定和药物的选择均有重大意义。 3.技术原理及性能指标： （1）完成PLK 1 siRNA对胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、 N87和胃粘膜细胞株GES-1的 FR-α表达的影响。 主要技术性能指标：PLK 1 siRNA干扰后，各组细胞的FR-α表达有不同程度的抑制作用，与对照组相比较，** p< 0.01，*** p< 0.001。 （2）观察了叶酸缺乏时，对胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜细胞株GES-1的 FR-α表达的影响。 主要技术性能指标：将细胞处于叶酸缺乏的培养基中培养一周后，各胃癌细胞的FR-α表达有不同程度的显著的表达作用，与对照组相比较，* p< 0.05，** p< 0.01。 （3）PLK 1 siRNA和叶酸缺乏联合对胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、 N87和胃粘膜细胞株GES-1的 FR-α表达的影响。 主要技术性能指标：PLK 1 siRNA干扰后和叶酸缺乏联合，胃癌细胞SGC-7901、N87、GES-1的FR-α表达有不同程度的抑制作用，与对照组相比较，* p< 0.05，** p< 0.01，*** p< 0.001。而BGC-823与对照组相比，未显出差异。 （4） 研究观察了叶酸缺乏环境恢复正常后，PLK 1 siRNA和叶酸缺乏联合组细胞的FR-α表达变化。 主要技术性能指标：PLK 1 siRNA干扰和叶酸缺乏环境恢复正常后，各胃癌细胞的FR-α表达有不同程度的抑制作用，与对照组相比较，** p< 0.01，*** p< 0.001。 （5）胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823 、 N87和胃粘膜细胞株GES-1、MKN45 MTHFR多态性的差别（MTHFR alpha的 677（C→T）和1298（A→C）两个位点的多态性）。 主要技术性能指标：在MTHFR基因的667位点除NCI-N87没有突变，GES-1、BGC-823、7901、MKN45均由C突变成T。而在1298位点，这几株细胞均为有基因的突变。 （6） PLK 1 siRNA对胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜细胞株GES-1肿瘤基因BCL-2和P53表达的影响。 主要技术性能指标：PLK 1 siRNA干扰后，各胃癌细胞的BCL-2表达有不同程度的抑制作用，与对照组相比较，** p< 0.01，*** p< 0.001。P53表达均明显增加，* p< 0.05，** p< 0.01。 （7） 研究了叶酸缺乏对胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜细胞株GES-1的MTHFR肿瘤基因BCL-2和P53表达的影响。 主要技术性能指标：将细胞处于叶酸缺乏的培养基中培养一周后，各胃癌细胞的BCL-2表达有不同程度增加作用，但与对照组相比较，未显出统计学差异。P53表达与对照组相比较，未显出统计学差异。 （8） PLK 1 siRNA和叶酸缺乏联合对胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、 N87和胃粘膜细胞株GES-1肿瘤基因BCL-2和P53表达的影响。 主要技术性能指标：PLK 1 siRNA干扰后和叶酸缺乏联合，胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、N87、GES-1的BCL-2表达有不同程度的抑制作用，与对照组相比较，* p< 0.05，** p< 0.01，*** p< 0.001。GES-1、BGC-823的P53表达与对照组相比较，** p< 0.01 （9）研究了叶酸缺乏环境恢复正常3天后，PLK 1 siRNA和叶酸缺乏联合组细胞的肿瘤基因BCL-2和P53表达的变化。 主要技术性能指标：PLK 1 siRNA干扰后和叶酸缺乏环境恢复正常3天后，胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、N87、GES-1的BCL-2表达有不同程度的抑制作用，与对照组相比较，* p< 0.05，** p< 0.01。 4.社会经济效益： 本研究，初步能证明PLK 1 siRNA和叶酸缺乏是有效的治疗手段，对胃癌病人将是一大福音，肿瘤基因的变化的测定，对胃癌治疗策略的指定和药物的选择均有重大意义。